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1、酶催化法
酶催化法生产L-亮氨酸通常是利用转氨酶转氨给α-酮基异己酸生成L-亮氨酸和组氨酸将相关的酶和NADH共价结合在膜上,让底物缓缓地经过膜而进行酶催化反应生成L一亮氨酸。如1981年,Wichmann er al.建立了一种用超滤膜制成的膜反应器,膜上共价结合了亮氨酸转氨酶、甲酸转氨酶、和NADH,当底物。α-酮基异己酸通过膜反应器后,可被催化生成L-亮氨酸,其中NADH通过甲酸同步氧化成CO2实现再生。
酶法生产氨基酸的优点是转化能力强,可避免代谢调控中的反馈抑制和反馈阻遏,并且其生物反应器紧凑,产物组分相对单一,易进行后工序加工处理,可以提高产品质量,降低成本。但酶法生产中所用到的酶需通过微生物发酵生成并提取精制,工艺过程比较复杂,且成本较高,因此目前尚未得到广泛的应用。如果能够低成本获得高酶活的酶,则酶法生产L-亮氨酸是一条经济可行的工艺路线。
2、发酵法
1987年德国学者Groegere采用添加前体物。α-酮基异己酸生产L-亮氨酸,当培养基中添加前体物。α-酮基异己酸的浓度为20g/L,谷氨酸棒杆菌ATCC 13032发酵57h,可生成16g/L L-亮氨酸,质量转化率91~96%,而采用分批流加培养法,可流加α-酮基异己酸32 g/L,发酵23h,产L-亮氨酸24g/L,α-酮基异己酸到L-亮氨酸的转化是经过转氨酶的催化生成的。
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