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转基因水稻 BT63(TT51-1)质粒分子标准物质
Plasmid DNA Containing Genetically Modified BT63 (TT51-1) Rice DNA Fragments
转基因水稻 BT63 (TT51-1)质粒分子标准物质的研制可用于转基因水稻、食品和饲料等的定量检 测、安全评价、实验室质量控制、方法评价与验证、技术仲裁等。
一、样品制备
本标准物质是将转基因 BT63(TT51-1)水稻转化体特异性序列和内标准基因片段共同构建于 pEASY-T3 载体,得到 pNIM-003质粒分子,经提取,纯化和质量检测及均匀性初检合格后稀释至 8.9×105 拷贝/μL 进行分装。
二、溯源性及定值方法
该标准物质采用测序法、数字 PCR 方法分别对转基因水稻 BT63(TT51-1)转化体特异性基因片 段和水稻内标准基因(RBE4)片断的拷贝数比值进行定值测量。测序法测量结果作为标准物质测序 比值标准值;数字 PCR 方法测量结果作为标准物质 PCR 比值标准值。本系列标准物质通过使用满足 计量学特性要求的制备方法、测量方法和计量器具,保证其量值溯源性。
三、特性量值及不确定度
编 号 |
标准值及不确定度 |
|||
GBW10090 |
测序比值 |
扩展不确定度(%) (k=2) |
PCR 比值 |
扩展不确定度(% (k=2) |
1.00 |
0.07 |
1.00 |
0.08 |
标准值不确定度评定考虑了定值方法、均匀性、稳定性引入的不确定度分量。
四、均匀性和稳定性考察
按照 JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》,采用采实时荧光定量 PCR 方法对 该标准物质进行均匀性检验研究,最小取样量 5μL,结果表明均匀性良好。按照先密后疏的原则采 用实时荧光定量 PCR 方法对该标准物质进行稳定性考察研究,标准值无方向性变化并通过平均值一 致性检验,表明稳定性良好。
本标准物质自定值日期起,有效期为 5 年,研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性,有 效期内如发现量值变化,将及时通知用户。
五、包装、储存及使用
1.包装与储存:本标准物质采用 2mL 立式拧口塑料离心管包装,500μL/瓶。建议-70?C 低温长期 保存。
2.使用注意事项:使用前应先从冰箱内取出,平衡至室温后再打开瓶盖使用。样品开封后,应 尽快恢复密封状态。
3.使用建议:使用本标准物质制作标准曲线时,按照表 1 进行梯度稀释,然后再采用荧光定量 PCR 进行检测,引物和探针序列[1, 2]详见表 2。
表 1 转基因水稻 BT63 质粒分子标准物质梯度稀释说明
初始浓度(copy/μL) |
终浓度(copy/μL) |
质粒 DNA(μL) |
TE(μL) |
8.9×105 |
8.9×104 |
20 |
180 |
8.9×104 |
2.2×104 |
50 |
150 |
2.2×104 |
2.2×103 |
20 |
180 |
2.2×103 |
2.2×102 |
20 |
180 |
2.2×102 |
2.2×101 |
20 |
180 |
表 2 外源基因和内标准基因的引物及探针序列
基因名称 |
引物或探针 |
序列信息 (5’-3’) |
扩增片段长度 /(碱基) |
外源基因 BT |
上游引物 |
AGAGACTGGTGATTTCAGCGGG |
120 |
下游引物 |
GCGTCCAGAAGGAAAAGGAATA |
||
探针 |
FAM-ATCTGCCCCAGCACTCGTCCG-BHQ1 |
||
内标准基因 RBE4 |
上游引物 |
GTTTTAGTTGGGTGAAAGCGGTT |
106 |
下游引物 |
CCTGTTAGTTCTTCCAATGCCCTTA |
||
探针 |
FAM-AGTATCTATTCCCAACCAGA-MGBNFQ |
声明
1.本标准物质仅供实验室研究与分析测试工作使用。因用户使用或储存不当所引起的投诉,不予承担责任。
2.收到后请立即核对品种、数量和包装,相关赔偿只限于标准物质本身,不涉及其他任何损失。
3.仅对加盖“中国计量科学研究院标准物质专用章”的完整证书负责。请妥善保管此证书。
4.如需获得更多与应用有关的信息,请与技术咨询部门联系。
注:以上信息仅供参考,以产品附带证书为准。
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