纳他霉素的含量测定

本品为(1R,3S,5R,7R,8E,12R,14E,16E,18E,20E,22R,24S,25R,26S)-22-[(3-氨基-3, 6-二脱氧-β-D-吡喃甘露糖基)氧基]-1,3,26-三羟基-12-甲基-10-氧代-6,11,28-三氧杂三环[22.3.1.05·7]二十八烷基-8,14,16,18,20-五烯-25-羧酸，按无水与无溶剂物计算，含C33H47NO13应为90.0%-102.0%。

1、性状

本品为类白色至淡黄色结晶性粉末。

本品在冰醋酸中溶解，在N,N-二甲基甲酰胺中略溶，在甲醇中微溶，在乙醇和水中几乎不溶。

2、鉴别

取本品50mg，加水5mL润湿，再加0.1%冰醋酸甲醇溶液溶解并稀释制成每1mL中约含5µg的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定，在317nm、303nm和290nm的波长处有最大吸收。

在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

3、检查

3.1 结晶性

取本品，依法检查（通则0981）测定，应符合规定。

3.2 酸碱度

取本品0.25g，加水制成每1mL中约含10mg的混悬溶液，依法测定（通则0631），pH值应为5.0~7.5。

3.3 有关物质

照高效液相色谱法（通则0512）测定，避光操作。

供试品溶液：取本品20mg，置100mL量瓶中，加甲醇约20mL，超声约15分钟使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀。

对照溶液：精密量取供试品溶液1mL，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。

系统适用性溶液：取那他霉素20mg，置100mL量瓶中，加盐酸甲醇溶液（取0.1mol/L盐酸1mL，加甲醇99mL，混匀）适量，摇匀，放置2小时，即得（1小时内使用）。

灵敏度溶液：精密量取对照溶液5mL，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6mm×250mm，5µm或效能相当的色谱柱），以乙酸铁缓冲液（取乙酸铵3.0g和氯化按1.0g，加水760mL溶解并混匀）-乙腈-四氢呋喃（76:24:0.5）为流动相，柱温40℃（必要时可适当凋节柱温），检测波长为303nm，进样体积20µL。

系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中，纳他霉素峰保留时间约为14分钟，那他霉素峰与杂质Ⅰ峰（相对保留时间约为1.3）之间的分离度应大于2.5，理论板数按那他霉素峰计算不小于3000，那他霉素峰拖尾因子为0.8~1.3。灵敏度溶液色谱图中，那他霸素峰高的信噪比应大于10。

测定法：精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。

限度：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，杂质Ⅰ峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2.0%），其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%），其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2.0%），小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计。

3.4 残留溶剂

照残留溶剂测定法（通则0861）测定，应符合规定。

3.5 水分

取本品，照水分测定法（通则0832第一法1）测定， 含水分应为6.0%~9.0%。

3.6 炽灼残渣

取本品1.0g，依法检查（通则0841），遗留残渣不得过0.2%。

3.7 重金属

取炽灼残渣项下的遗留残渣，依法检查（通则0821第二法），含重金属不得过百万分之十。

4、含量测定

照高效液相色谱法（通则0512）测定。

4.1 供试品溶液

取本品约20mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇约20mL，超声约15分钟使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀。

4.2 对照品溶液

取那他霉素对照品20mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇约20mL，超声约15分钟使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀。

系统适用性溶液与色谱条件见有关物质项下。

4.3 系统适用性要求

除灵敏度要求外，其他见有关物质项下。

5、测定法

精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。

相关链接：N,N-二甲基甲酰胺，乙酸铵，纳他霉素，乙腈，四氢呋喃，十八烷基硅烷，北纳生物

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