吡哌酸的含量测定

本品为8-乙基-5-氧代-5,8-二氢-2-(1-哌嗪基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-6-羧酸三水合物，按无水物计算，含C14H17N5O3不得少于98.5%。

一、性状

本品为微黄色至黄色的结晶性粉末，无臭。

本品在甲醇中微溶，在水中极微溶解，在乙醇或乙醚中不溶，在冰醋酸或氢氧化钠试液中易溶。

二、鉴别

1、取本品与吡哌酸对照品各适量，分别加流动相溶解并稀释制成每1mL中约含0.1mg的溶液，作为供试品溶液与对照品溶液。照有关物质项下的色谱条件测定，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

2、取本品，加0.01mol/L的盐酸溶液溶解并稀释制成每1mL中约含3μg的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401）测定，在275nm的波长处有最大吸收。

3、本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集189图）一致。

三、检查

1、碱性溶液的澄清度

取本品0.50g，加氢氧化钠试液10mL溶解后，溶液应澄清（通则0902）。

2、有关物质

照高效液相色谱法（通则0512）测定。

供试品溶液：取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中约含0.3mg的溶液。

对照溶液：精密量取供试品溶液适量，用流动相定量稀释制成每1mL中含0.6µg的溶液。

系统适用性溶液：取吡哌酸适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中约含0.3mg的溶液，置敞口玻璃容器中，在紫外光下5cm处照射3小时（30W）或6小时（15W），得吡哌酸与其降解杂质的混合溶液（其中与主峰相对保留时间0.8和1.2处杂质的量不少于0.2%）。

灵敏度溶液：精密量取对照溶液适量，用流动相定量稀释制成每1mL中含0.06µg的溶液。

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以枸橼酸癸烷磺酸钠溶液（取枸橼酸5.7g、癸烷磺酸钠1.7g，加水溶解并稀释至1000mL）-乙腈-甲醇（60:20:20）为流动相，检测波长为275nm，进样体积20µL。

系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中，吡哌酸峰的保留时间约为18分钟，吡哌酸酸峰与其相对保留时间0.8和1.2处杂质峰间的分离度应分别大于4.5和3.5。灵敏度溶液色谱图中，主成分峰峰高的信噪比应大于10。

测定法：精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。

限度：供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面积（0.2%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的5倍（1.0%），小于对照溶液主峰面积0.25倍的峰忽略不计。

3、干燥失重

取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量应为15.0%～16.0%（通则0831）。

4、炽灼残渣

取本品1.0g，置铂坩埚中，依法检查（通则0841），遗留残渣不得过0.2%。

5、重金属

取本品1.0g，置铂金坩埚中，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5mL～1.0mL，使恰湿润，低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5mL，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500℃～600℃炽灼使完全炭化，依法检查（通则0821第二法），含重金属不得过百万分之二十。

6、含量测定

取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸20mL溶解后，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显纯蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于30.33mg的C14H17N5O3。

相关链接：吡哌酸，枸橼酸，癸烷磺酸钠，冰醋酸，氢氧化钠，结晶紫指示液，北纳生物

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